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電子顯微鏡的組成部分 電子顯微鏡樣本的預(yù)處理方法

摘要:電子顯微鏡,簡(jiǎn)稱電鏡,經(jīng)過五十多年的發(fā)展已成為現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)中不可缺少的重要工具。電子顯微鏡由鏡筒、真空裝置和電源柜三部分組成。我們知道電子顯微鏡對(duì)樣本的要求比較高,因此在觀察生物樣本的時(shí)候必須進(jìn)行預(yù)處理。一般的處理過程包括:固定、冷固定、脫干、墊入、分割、染色等。接下來就一起來了解下電子顯微鏡的知識(shí)吧。

一、電子顯微鏡的組成

電子顯微鏡由鏡筒、真空裝置和電源柜三部分組成。

1、鏡筒

主要有電子源、電子透鏡、樣品架、熒光屏和探測(cè)器等部件,這些部件通常是自上而下地裝配成一個(gè)柱體。

電子透鏡用來聚焦電子,是電子顯微鏡鏡筒中最重要的部件。一般使用的是磁透鏡,有時(shí)也有使用靜電透鏡的。它用一個(gè)對(duì)稱于鏡筒軸線的空間電場(chǎng)或磁場(chǎng)使電子軌跡向軸線彎曲形成聚焦,其作用與光學(xué)顯微鏡中的光學(xué)透鏡(凸透鏡)使光束聚焦的作用是一樣的,所以稱為電子透鏡。光學(xué)透鏡的焦點(diǎn)是固定的,而電子透鏡的焦點(diǎn)可以被調(diào)節(jié),因此電子顯微鏡不像光學(xué)顯微鏡那樣有可以移動(dòng)的透鏡系統(tǒng)?,F(xiàn)代電子顯微鏡大多采用電磁透鏡,由很穩(wěn)定的直流勵(lì)磁電流通過帶極靴的線圈產(chǎn)生的強(qiáng)磁場(chǎng)使電子聚焦。電子源是一個(gè)釋放自由電子的陰極,柵極,一個(gè)環(huán)狀加速電子的陽(yáng)極構(gòu)成的。陰極和陽(yáng)極之間的電壓差必須非常高,一般在數(shù)千伏到3百萬伏特之間。它能發(fā)射并形成速度均勻的電子束,所以加速電壓的穩(wěn)定度要求不低于萬分之一。

樣品可以穩(wěn)定地放在樣品架上,此外往往還有可以用來改變樣品(如移動(dòng)、轉(zhuǎn)動(dòng)、加熱、降溫、拉長(zhǎng)等)的裝置。

探測(cè)器用來收集電子的信號(hào)或次級(jí)信號(hào)。

2、真空裝置

用以保障顯微鏡內(nèi)的真空狀態(tài),這樣電子在其路徑上不會(huì)被吸收或偏向,由機(jī)械真空泵、擴(kuò)散泵和真空閥門等構(gòu)成,并通過抽氣管道與鏡筒相聯(lián)接。

3、電源柜

由高壓發(fā)生器、勵(lì)磁電流穩(wěn)流器和各種調(diào)節(jié)控制單元組成。

二、電子顯微鏡如何進(jìn)行樣本處理

1、固定:為了盡量保存樣本的原樣使用戊二醛來硬化樣本和使用鋨酸來染色脂肪。

2、冷固定:將樣本放在液態(tài)的乙烷中速凍,這樣水不會(huì)結(jié)晶,而形成非晶體的冰。這樣保存的樣品損壞比較小,但圖像的對(duì)比度非常低。

3、脫干:使用乙醇和丙酮來取代水。

4、墊入:樣本被墊入后可以分割。

5、分割:將樣本使用金剛石刃切成薄片。

6、染色:重的原子如鉛或鈾比輕的原子散射電子的能力高,因此可被用來提高對(duì)比度。

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