一、培養(yǎng)基的制備常見問題及原因分析

培養(yǎng)基的配制是微生物實驗人員的基本技能之一，適宜的培養(yǎng)基制備方法、選擇正確的滅菌方式、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證，在制備培養(yǎng)基的過程中，可能會遇到以下幾種問題：

1、培養(yǎng)基不能凝固

（1）制備過程中過度加熱。

（2）低pH造成培養(yǎng)基酸解。

（3）稱量不正確瓊脂未完全溶解。

（4）培養(yǎng)基成分未充分混勻。

2、pH不正確

（1）制備過程中過度加熱。

（2）水質(zhì)不佳。

（3）外部化學(xué)物質(zhì)污染。

（4）測定是溫度不正確。

（5）pH計為正確校準(zhǔn)。

（6）脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。

3、顏色異常

（1）制備過程過度加熱。

（2）水質(zhì)不佳。

（3）pH不正確。

（4）外來污染。

（5）脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。

4、產(chǎn)生沉淀

（1）制備過程過度加熱。

（2）水質(zhì)不佳。

（3）pH不正確。

（4）原料中的雜質(zhì)。

（5）脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。

5、培養(yǎng)基出現(xiàn)抑制/低生長率

（1）制備過程過度加熱。

（2）水質(zhì)不佳。

（3）脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。

（4）使用成分不正確，添加劑用量不正確。

（5）容器或水中的有毒殘留物。

6、選擇性差

（1）制備過程過度加熱。

（2）脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差。

（3）配方使用不對。

（4）添加成分不正確，例如添加成分是培養(yǎng)基過熱、添加濃度錯誤等。

7、污染

（1）無菌操作存在問題。

（2）添加劑污染。

（3）不適當(dāng)滅菌

二、制備培養(yǎng)基如何減少失敗率

制備培養(yǎng)基的時候，因為操作不當(dāng)可能會出現(xiàn)各種問題，導(dǎo)致制備失敗，為了減少失敗率，制備培養(yǎng)基時要注意：

1、選擇合適的培養(yǎng)基配方

同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對，再依據(jù)自己的使用目的加以選用，記錄其來源。

2、培養(yǎng)基成分的稱取要精確

培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂，最好一次完成，不要中斷。可將配方置于傍側(cè)，每稱完一種成分即在配方上做出記號，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。

3、培養(yǎng)基各成分的混合和溶化要注意

培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長。最好使用不銹鋼鍋加熱溶化，也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動，以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化。

4、調(diào)整好pH

培養(yǎng)基各成分完全溶解后，應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正，因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會有所變化，例如，牛肉浸液約可降低pH0.2。而腸浸液pH卻會有顯著的升高。因此，對這個步驟，操作者應(yīng)隨時注意探索經(jīng)驗、以期能掌握培養(yǎng)基的最終pH，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH調(diào)正后，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。