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高效液相色譜儀有什么特點 高效液相色譜儀原理是什么

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摘要:1960年代,由于氣相色譜對高沸點有機物分析的局限性,為了分離蛋白質(zhì)、核酸等不易氣化的大分子物質(zhì),氣相色譜的理論和方法被重新引入經(jīng)典液相色譜。1960年代末科克蘭(Kirkland)、哈伯、荷瓦斯(Horvath)、莆黑斯、里普斯克等人開發(fā)了世界上第一臺高效液相色譜儀,開啟了高效液相色譜的時代。接下來本文將簡單介紹高效液相色譜儀有什么特點以及高效液相色譜儀原理是什么,一起到文中來看看吧!

一、高效液相色譜儀有什么特點

高效液相色譜儀的顯著特征是高壓、高速、高效、高靈敏度、高選擇性和應(yīng)用范圍廣等。

1、高壓

高效液相色譜儀為了獲得高柱效,使用的固定相粒徑很小(<10um),液體流動相高速通過時,產(chǎn)生很高的壓力,工作壓力范圍為1.5×107~3.5×107Pa。

2、高速

由于釆用了高壓,流動相流速快,所需的分析時間比經(jīng)典液相柱色譜儀少得多。

3、高效

高效液相色譜儀的柱效能約3萬塔板/米,氣相色譜儀的柱效能約2000塔板/米。

4、高靈敏度

由于采用了高靈敏度的檢測器,最小檢測量可達10-9g,甚至10-11g,而所需樣品量很少。

5、高選擇性

可以通過控制流動相改善分離過程的選擇性。

6、應(yīng)用范圍廣

高效液相色譜儀可用于高沸點、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來說,沸點在450℃以下,相對分子質(zhì)量小于450的有機物可用氣相色譜儀分析,但這些物質(zhì)只占有機物的15%~20%,其余的80%~85%有機物原則上可采用高效液相色譜儀分析。

二、高效液相色譜儀原理是什么

高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理,主要用于分析高沸點不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機化合物的儀器設(shè)備。它由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中做相對運動時,經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。

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