色譜柱各個(gè)參數(shù)的含義
1.柱長(zhǎng):一般以毫米(mm)為單位,常見(jiàn)的有 100mm、150mm、250mm 等。柱長(zhǎng)主要影響分離度和分析時(shí)間,柱長(zhǎng)越長(zhǎng),分離效果通常越好,但分析時(shí)間也會(huì)相應(yīng)延長(zhǎng),同時(shí)柱壓也會(huì)增加。
2.內(nèi)徑:通常在 0.1mm-5mm 之間,如 0.25mm、4.6mm、10mm 等。內(nèi)徑大小決定了樣品的負(fù)載量和流動(dòng)相的流速。內(nèi)徑越大,樣品負(fù)載量越高,需要的流動(dòng)相流量也越大,但柱效可能會(huì)有所降低;內(nèi)徑越小,柱效越高,所需流動(dòng)相流量越小,但對(duì)儀器的要求更高,且樣品負(fù)載量較低。
3.固定相種類(lèi):不同的固定相具有不同的化學(xué)性質(zhì)和分離特性,決定了色譜柱的適用范圍和分離機(jī)制。常見(jiàn)的有反相 C18 柱,其固定相是十八烷基硅烷鍵合硅膠,適用于分離非極性和中等極性的化合物;正相硅膠柱,以硅膠為固定相,常用于分離極性化合物;離子交換柱,固定相帶有離子交換基團(tuán),用于分離離子型化合物等。

4.粒徑:指固定相顆粒的大小,通常用微米(μm)表示,常見(jiàn)的有 3μm、5μm、10μm 等。粒徑越小,柱效越高,分離效果越好,但柱壓也越高,對(duì)儀器的要求也更高,同時(shí)價(jià)格也相對(duì)較貴。大粒徑的固定相則柱壓低,適用于一些對(duì)柱壓有要求的儀器或大規(guī)模制備色譜,但分離效果相對(duì)較差。
5.孔徑:對(duì)于一些多孔性的固定相,孔徑是一個(gè)重要參數(shù),一般以埃(?)為單位,常見(jiàn)的有 60?、100?、300? 等。孔徑大小影響著樣品分子在固定相內(nèi)部的擴(kuò)散和傳質(zhì)過(guò)程??讖捷^大時(shí),適用于分離大分子化合物,可避免分子在孔內(nèi)的擴(kuò)散受限;孔徑較小時(shí),對(duì)小分子化合物的分離效果較好,能提供較大的比表面積和較高的柱效。
6.柱效:是衡量色譜柱分離效能的指標(biāo),通常用理論塔板數(shù)(N)或塔板高度(H)來(lái)表示。理論塔板數(shù)越多,或塔板高度越小,說(shuō)明色譜柱的柱效越高,分離能力越強(qiáng)。柱效與固定相的性質(zhì)、粒徑分布、填充均勻性以及流動(dòng)相的性質(zhì)、流速等因素有關(guān)。